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多聚磷酸對GFP相態(tài)轉變的影響

信息來(lái)源:www.hxnhc.cn | 發(fā)布時(shí)間:2020年11月04日

多聚磷酸對GFP相態(tài)轉變的影響,首 先,分別觀(guān)測了LB培養基中表達了GFP的細菌與SMW培養基(低養分培養基)中細菌表達的GFP的狀態(tài)。多聚磷酸廠(chǎng)家,多聚磷酸價(jià)格。實(shí)驗結果顯示,LB培養基中的細菌GFP均勻分散在菌體中,而SMW培養基中的細菌蛋白發(fā)生了明顯的相分離,蛋白分別聚集于菌體的兩端。由于兩種培養基中細菌內多聚磷酸含量具有差異,因此設想這種相分離的發(fā)生與細菌內部的多聚磷酸有關(guān)。

接下來(lái),利用陽(yáng)離子染料DAPI對細菌內部的多聚磷酸進(jìn)行染色,發(fā)現在發(fā)生相分離的細菌體中,GFP的綠色熒光點(diǎn)與多聚磷酸包裹的DAPI形成的黃色點(diǎn)發(fā)生重合,這則初步證實(shí)了多聚磷酸與蛋白的相互作用誘發(fā)了這種相分離行為。
動(dòng)態(tài)過(guò)程顯示,綠色熒光蛋白在濃度逐漸增高的多聚磷酸的作用下逐漸發(fā)生聚集,最后在30分鐘時(shí)在細菌的兩端形成蛋白微液滴結構。進(jìn)一步的實(shí)驗中,通過(guò)逐漸調節培養基中的養分濃度來(lái)控制細菌內的多聚磷酸含量,結果在60分鐘時(shí),GFP依舊發(fā)生了聚集。而反過(guò)來(lái),逐漸提高培養基中的養分,原本聚集的GFP又分散開(kāi)來(lái)。以上現象充分證明了多聚磷酸對GFP的相分離起到了重要作用。

多聚磷酸含量對蛋白聚集的影響
隨后,在菌體外進(jìn)行了液-液相分離機理的研究。首 先,發(fā)現未加入多聚磷酸的GFP溶液始終是澄清的,而加入了多聚磷酸的GFP溶液隨時(shí)間推移發(fā)生渾濁,顯微鏡下可以明顯觀(guān)測到在該溶液中存在蛋白小液滴。以此現象為基礎,通過(guò)調節多聚磷酸的鏈長(cháng)以及陰陽(yáng)離子的比例(R-/+)來(lái)對多聚磷酸與蛋白的相互作用機理進(jìn)行評估。實(shí)驗結果顯示,多聚磷酸的存在對蛋白的相分離有明顯的促進(jìn)作用;并且隨著(zhù)多聚磷酸鏈長(cháng)的增加,蛋白相分離的驅動(dòng)力變大,越容易發(fā)生蛋白的液-液相分離;與此同時(shí),電荷比對相分離現象也有明顯的影響,R-/+越大,形成的液滴越大,即越容易發(fā)生相分離。